1. 竞争性反应

这个检测方法依靠单克隆抗体来识别17β-Estradiol。样品中的17β-Estradiol和一个17β-Estradiol-酶结合物预先混合然后加入到每个微孔中竞争与包被在微孔表面的特异性抗体。样品中17β-Estradiol的浓度如果高于17β-Estradiol -酶结合物，17β-Estradiol将主要与抗体结合。反之样品中17β-Estradiol的浓度如果低于于17β-Estradiol -酶结合物，17β-Estradiol -酶结合物将主要与抗体结合。

2. 定量分析

利用已知浓度的17β-Estradiol标准的浓度和在450nm条件下获得的吸光度值做出一条剂量反应曲线（标准曲线）。把样品的吸光度值用内插法插入到标准曲线中可以精确的计算出样品中BPA的浓度。

        3. 显色反应

通过洗涤步骤去除没有反应的17β-Estradiol和过量的17β-Estradiol -酶结合物。和微孔板中抗体结合的17β-Estradiol -酶结合物催化底物发生反应产生有色物质。通过一个孵育期用烯酸终止反应。样品中17β-Estradiol的浓度越高导致结合到微孔板抗体上的17β-Estradiol -酶结合物越少，从而产生的颜色越淡，吸光度越低。